Método de amplificación sola cartilla desarrollado por Welsh y McClelland. Generalmente grandes iniciadores solos de 20-30 nucleótidos se recuecen para luego amplificado por PCR en condiciones nonstringent para dos ciclos de ADN Diana. Entonces se incrementa el rigor (es decir, temperatura). Los productos están separados por autorradiografía y electroforesis en geles de poliacrilamida.